抗体的FITC标记
FITC（异硫氰酸荧光素，Fluorescein Isothiocyanate）是一种广泛应用的荧光染料，其核心特性和应用如下：分子结构包含荧光素母核和活性异硫氰酸酯基团（-N=C=S），分子式为C₂₁H₁¹NO₅S，分子量约389.38 g/mol。常温下呈黄色至橙黄色粉末，易溶于水和醇类溶剂。激发/发射波长：最大激发波长约494 nm，最大发射波长520 nm左右，发出明亮的黄绿色荧光。荧光稳定性：受pH和铜离子（Cu²⁺）浓度影响显著，酸性环境或高Cu²⁺会淬灭荧光。易光漂白：长时间光照下易降解，新型衍生物（如Alexa 488）可改善此缺陷。
核心应用领域
生物分子标记：异硫氰酸酯基团可与蛋白质的氨基（-NH₂）、巯基（-SH）等反应，形成稳定共价键。常用于标记抗体、凝集素、多肽等，用于免疫荧光、Western Blot、流式细胞术等检测。生物成像与诊断免疫荧光染色：标记抗体后定位细胞或组织中的抗原分布。流式细胞术：作为绿色荧光通道探针，分析细胞表面标志物或胞内蛋白。病原体快速检测：如标记抗体鉴定细菌或病毒
FITC标记抗体
1).将待标记的抗体（浓度≧1mg/ml）用标记反应液 (90mM NaHCO3，10mM Na2CO3，126mMNaCl，pH9.0)透析三次(4℃)；
2).将FITC溶于DMSO中，浓度为20mg/ml。每次交联使用的FITC均应新鲜配制，避光；
3).（抗体：FITC）=1mg:150μg的比例将FITC缓慢加入于抗体溶液中，边加边轻轻晃动使其与抗体混合均匀，避光4℃反应8h；
4). 加入5M的NH4Cl至终浓度50mM，4℃终止反应2h；
5). 将标记产物在PBS中透析四次以上，至透析液清亮；
6). 交联物的鉴定
抗体浓度(mg/ml)=[A280–0.31×A495]/1.4
抗体：FITC比例=3.1×A495//【A280–0.31×A495] 】，该值应介于2.5～6.5之间；
7). FITC标记的抗体应置于pH7.4的磷酸盐缓冲液中，加入0.1% NaN3、1% BSA，30%甘油，短期保存于4℃避光，长期应该-20℃避光保存。